Kit 1: Transformation af gåsemad, selektion og GUS-farvning

 

Kit 1 viser, hvordan man gensplejser og udvælger gensplejsede planter. Kit 1 består af to dele, som bestilles uafhængigt af hinanden. Hvis del 1 bestilles, anbefales det også at bestille del 2.

 

Kit 1, del 1 (Pakke B): Transformation

Eleverne skal selv transformere planten gåsemad. Til at indføre gener i planten anvendes jordbakterien, Agrobacterium, hvori der er indsat et selektionsgen, der gør planter resistenste over for kanamycin og et markørgen, der koder for glucuronidase (GUS).

 

Øvelsesvejledninger 

Tjek på Biotek kap. 13. Øvelsesvejledning Kit 1, produktion af planter

Tjek på Biotek kap. 14. Øvelsesvejledning Kit 1, transformation

Tjek på Biotek kap. 15. Øvelsesvejledning Kit 1, høst af frø

 

Det tager flere uger og kræver stor omhu at dyrke gåsemad. Derfor indeholder pakke B planter, som er klar til transformation. Vi udsender gerne frø, så der er mulighed for selv at dyrke planter til transformation, som beskrevet i Tjek på Biotek kap. 13.

 

Pakke B indeholder materialer til ca. 15 elever
YEP medie	1 L
1M MgCl2	30 ml
150 ul 100 % Silwet	150 ul
Kanamycin (50 mg/ml)	1 ml
Kloramfenikol (100 mg/ml)	1 ml
Rifampicin (34 mg/ml)	3 ml
YEP plade m pCambia 2201	3-5 stk
Vildtype Arabidopsisplanter med blomsterknopper	4 stk

 

Tip: Når de første skulper begynder at blive brune, vandes potten op, og der sættes en papirspose over blomsterstanden. Planten lægges på en bakke, indtil frøene er modne. Planten skal ikke vandes. Frøene falder ud af skulperne, når de er modne, og opsamles i papirsposen.

 

Tip: Høstede frø fra transformerede planter gemmes i køleskab og bruges til sterilisation og GUS-farvning (kit 1, del 2). 

 

Bestilling og levering af kit 1, del 1 (Pakke B)  

Kit 1, del 1 kan udsendes i følgende uger:

• Uge 40. Bestil senest uge 28
• Uge 43. Bestil senest uge 31
• Uge 6. Bestil senest i uge 34
• Uge 9. Bestil senest i uge 34
• Obs! Vi har kun kapacitet til dyrkning af et vist antal planter, så bestil så tidligt som muligt. 

Pris: 300 kr. for en pakke med materialer til ca. 15 elever.  

 

Kit 1, del 2 (Pakke C): Sterilisation, selektion og GUS-farvning

Øvelserne kan gennemføres uafhængigt af del 1. Hvis eleverne selv har produceret frø i ovenstående delforsøg, anvendes disse frø til sterilisation, selektion og GUS-farvning. De leverede frø af transformeret Arabidopsis kan benyttes til sammenligning af transformationsprocent.

 

Øvelsesvejledninger  

Tjek på Biotek kap. 16. Øvelsesvejledning Kit 1, transformationsprocent

Tjek på Biotek kap. 17. Øvelsesvejledning Kit 1, X-gluc

 

 

Pakke C indeholder materialer til ca. 15 elever
5 % NaOCl	100 ml
20 % Triton X-100	0,5 ml
Kanamycin (50mg/ml)	1 ml
MS-medie	500 ml
Top agar med kanamycin	400 ml
Top agar uden antibiotika	100 ml
X-glu	25 ml
Frø af vildtype Arabidopsis	ca. 1000 stk
Frø af transformerede Arabidopsis	ca. 4000 stk

 

Bestilling og levering af kit 1, del 2 (Pakke C) 

Kit 1, del 2 udsendes i uge 6 eller 9. Bestil senest i uge 34.  

Pris: 300 kr. for en pakke med materialer til ca. 15 elever.

 

Gå til bestillingsblanket.

 

Indsendelse af laboratorieskema

Efter forsøgene skal laboratorieskema sendes til: 

Evy Olsen

Institut for Plantebiologi og Bioteknologi

Det Biovidenskabelige Fakultet, Københavns Universitet

Thorvaldsensvej 40

1871 Frederiksberg C